Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者成果缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次借助于现去甲自身上皮细胞到借助于现1改型哮喘医学腹泻的的的发展率在青少年里面后期就有很好的叙述，多个去甲自身上皮细胞无症状的青少年里面有70%在血清转化后10年底患上哮喘，而随访15年的青少年这一数目减低到84%。即便如此，分之一医学1改型哮喘一半以上的改型1改型哮喘的中风机制还不能受益必要的学术研究。

愈加多的人开始可用分期系统会来定义1改型哮喘的的的发展：个体在借助于现多种去甲自身上皮细胞时进入第1过渡阶段，借助于现食欲持续性时进入第2过渡阶段，借助于现腹泻时进入第3过渡阶段。一些多发去甲自身上皮细胞无症状的个体，在1期和2期，的的发展更快，并的发展为中风的1改型哮喘。我们之前叙述了一四组在首次检测到多种去甲自身上皮细胞样本后至少10年无哮喘的变较慢的的发展者，这四组病患者人数少，但外观上非常明确。随后，我们辨认出去甲自身上皮细胞特异性CD8+T线粒体反其所在的的发展较较慢的病患者里面理论上不存在，但在早先中风和长期存在的哮喘病患者里面很容易检测到。这有可能得出结论，与的的发展病患者远比，这些病患者自身免疫反其所的平衡增强。

早期学术研究得出结论，尽管平衡性T线粒体(Treg)生产量正常，但哮喘病患者存在一些功能缺陷，其里面包括对IL-2的反其所能力减少。此外，哮喘病患者里面的波动CD4+T线粒体有可能对平衡更具抵抗性，表现为波动T线粒体的抑制作用减弱，自然产生的Treg和体外产生的诱导Treg，以及上皮细胞经历的CD4+T线粒体里面IL-2反其所减弱。本学术研究的目标是叙述了CD4+平衡性T线粒体(Treg)在一小群极较较慢的的发展者里面的外观上，他们的平均年长为43岁(31-72岁)，随访一段时间为18-32年。

方法：BOX学术研究是一项以人群为基础的侧向学术研究，在21岁以下确诊的病患者子女里面检查1改型哮喘的危险原因。我们之前叙述了长期较较慢的的发展者的外观上，他们依然多重去甲自身上皮细胞无症状超过10年，但不能借助于现哮喘的医学腹泻，较慢性或非开展性自身免疫。随后，10名继续依然无哮喘并想要备有大量血清样本的较较慢的的发展者归属于T和B线粒体功能数据分析。在目前的学术研究里面，8名较慢的的发展者(SP四组)，里面位年长43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此之间的去甲自身上皮细胞无症状。所有的举例来说都处于1改型哮喘的的发展的1期，尽管一些人随后失去了去甲自身上皮细胞对某些上皮细胞的无症状反其所，然而，一名病患者已经处于2期至少6年，但不能借助于现医学腹泻，一名病患者被确诊为哮喘，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c上升时到53 mmol/mol(7%)，在数据分析里面对该丝氨酸开展了之外评质子。分离外周血单个质子线粒体(PBMCs)，采行多参数流式线粒体妖术和T线粒体抑制作用试验评质子丝氨酸里面Treg的Hz、表改型和功能。可用FlowSOM和CITRUS(聚类深入研究、表征和回归)开展无都由聚类数据分析，评质子Treg表改型。

结果：与健康丝氨酸远比，来自较慢的的发展体的清醒CD4+T线粒体的都由聚类结果显示，作用于的清醒CD4+ TregHz减低，与组胺诱导的TNFR就其受体(GITR)隐含减低有关。一名HbA1c上升时的病患者与的的发展较较慢者和最简单的对照四组远比，Treg谱有所相异。功能数据分析得出结论，与健康丝氨酸远比，来自较较慢的的发展体的Treg介导的CD4+波动T线粒体抑制作用相比受损。表现为对波动CD4+T线粒体CD25和CD134隐含的抑制作用减低。

所示1 熟悉的表改型数据分析结果显示，CD4+Treg亚改型在较慢的的发展链表里面减低。由FlowSOM转化的Treg三楼，聚集在来自所有丝氨酸的能活CD4+CD45RA -线粒体上。根据标示出物隐含深入研究借助于10个元簇:清醒T线粒体_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T线粒体;HLA-DR + GITR +清醒T线粒体;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)可用9个相异Treg标示出转化的10个元簇的MST。每个数据流代表一个战斗群(100个战斗群)，更大的元战斗群(10个元战斗群)在数据流四组周围手绘。每个数据流里面的饼所示表示单个标示出的隐含行政级别。(b)每个元聚类的热所示，以结果显示整体而言标示出隐含。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)转化所示，以及FlowSOM定位的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对来说轻元素为每个metacluster罐终点站所示(轻元素> 0.05%)已确定为HD和SP四组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T线粒体(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T线粒体(l)。橘色左上角代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩深入研究。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 可用CITRUS的数据分析证实，TregHz的减低是的的发展较较慢的徽标。分级离子通道(a - f)和柑橘数据分析(g-k)比较SP举例来说和最简单的HD举例来说在CD4+CD45RA−T线粒体上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的纪念性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富含，然后通过HLA-DR和GITR隐含开展分离，模拟器FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(黑斑)四组以及丝氨酸SP 606(橘色)里面CD25+ cd127的Hz统计所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+离子通道侄集的罐终点站所示;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)柑桔簇臂由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含强度着色，箭头突借助于的簇被定位为SP和HD链表彼此之间的相异。(j)罐终点站所示结果显示了在SP(黑斑)和HD(灰点)四组里面，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相对来说轻元素(数目)。(k)直方所示结果显示每个簇的表改型(粉红色)和Treg标示出相对来说隐含与或多或少隐含(蓝色);上列，存储器Treg_3;下面一行，存储器Treg_4。或多或少与所有其他簇里面标示出的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩深入研究

所示3 与健康献血者远比，的的发展较较慢者清醒treg的GITR减低。每个清醒CD4+T线粒体元簇(清醒T线粒体_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T线粒体;HLA-DR + GITR +清醒T线粒体;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个隐含标示出的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的隐含热所示(sp606不包括在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇里面所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR隐含串联，结果显示直方所示(c)和统计所示(d)。Wilcoxon配对符号秩和深入研究，p< 0.07(橘色)所有丝氨酸包括，p< 0.05(蓝色)丝氨酸SP 606和最简单的HD不包括在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR隐含，从分级离子通道，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(橘色)串联，结果显示直方所示(e)和统计所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩深入研究

所示4 来自较较慢的的发展的CD4+ treg线粒体支配波动CD4+T线粒体的能力减少。SP四组用蓝色的终点站和左上角表示，HD四组用黑色的终点站和左上角表示，橘色的终点站/左上角表示丝氨酸sp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T线粒体开展分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标示出为CFSE, Treg按仔细观察的数目指示剂。用抗CD3 /28微珠转化线粒体，人才培养3天内开展流式线粒体妖术检测。(a-d)与CD4+反之亦然者相对来说其所的treg人才培养(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者人才培养。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE抑制作用倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用倍数。可用无症状对照(作用于的响其所线粒体不含treg)计数抑制作用倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 波动CD4+T线粒体对较较慢的的发展的T线粒体转化的抑制作用更敏感。SP四组用蓝色的终点站和左上角表示，HD四组用黑色的终点站和左上角表示，橘色的终点站/左上角表示丝氨酸sp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T线粒体开展分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标示出，treg按仔细观察的数目指示剂。用抗CD3 /28微珠转化线粒体，人才培养3天内开展流式线粒体妖术(CD25反染)和线粒体因侄数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者主导人才培养。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE抑制作用次之(b)。(c,d) CD25抑制作用次之(c)和CD134抑制作用次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养里面的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得借助于的结论是，来自较较慢的的发展侄的转化清醒CD4+Treg在GITR隐含里面受益了扩展和丰富，凸显了进一步学术研究Treg在1改型哮喘风险个体里面的异质性的必要性。

原文借助于处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28